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了解相差顯微鏡

更新時(shí)間:2013-10-23      點(diǎn)擊次數(shù):3962

相差顯微鏡對(duì)于觀察不染色的透明的細(xì)胞有著非常重要的意義,它能把透明細(xì)胞間細(xì)微的差別清晰的出現(xiàn)出來(lái),達(dá)到觀察的目的。

相差顯微鏡(phasecontrast microscope)由P.Zernike于1932年發(fā)明,并因此獲1953年諾貝爾物理獎(jiǎng)。這種顯微鏡zui大的特點(diǎn)是可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。

相差顯微鏡的基本原理是,把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn)。光線透過(guò)標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來(lái)的光路,同時(shí)被延遲了1/4λ(波長(zhǎng)),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處:

1.環(huán)形光闌(annular diaphragm) 位于光源與聚光器之間,作用是使透過(guò)聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標(biāo)本上。

2.相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:

1.A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波相加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周?chē)橘|(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱(chēng)負(fù)反差)。

2.B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱(chēng)正反差),結(jié)構(gòu)比周?chē)橘|(zhì)更加變暗。

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